非靶向代谢组学分析采用色谱-质谱联用技术采集样品的代谢谱图,比较不同组样品代谢产物的含量,鉴定差异表达的代谢物,并探索差异代谢物之间的代谢通路。代谢组学分析技术已广泛应用于疾病诊断、药物靶点发现、疾病机理研究、营养食品科学、毒理学、植物学等相关领域,已成为目前研究的新热点。

技术优势

  • 基于先进的液相串联质谱技术,检测多达上千种pg级化合物化合物,可以胜任热不稳定、不易挥发、不易衍生化等物质的检测;
  • 侧重于相关特定组分共性研究,筛检有意义代谢产物,检测成本较低;
  • 提供从基因组学、转录组学、蛋白质组学到代谢组学的全程科技服务,深度剖析生物学现象。


技术路线


分析内容

  • 数据前处理(基线校正,峰匹配等)
  • 单变量分析
  • 多元变量统计分析;PCA分析,PLS-DA分析
  • 差异m/z值筛选及鉴定
  • 聚类分析
  • 差异代谢物Pathway代谢通路注释分析

样本类型

细胞,组织,尿液,全血,血清,血浆等

建议起始量(单次):血浆或血清>300 μL,尿液> 5 mL,组织> 100 mg,细胞>107个。


送样建议

1. 悬浮细胞:取生长状态良好的细胞悬液,先以200-1000g离心5-10min,弃培养基得细胞沉淀;再加入3mL无酶水配制的1×PBS重悬,200g离心5min,弃PBS,重复洗涤2次;最后将沉淀转移至耐-192℃低温的螺纹口冻存管,液氮速冻1小时后,-80℃保存或干冰运输;

2. 贴壁细胞:弃培养液,用预冷1×PBS(无酶水配制)轻摇洗涤2次;将培养皿置冰上,加预冷PBS后快速用细胞刮棒刮下细胞,冰上斜置收集悬液,200-1000g离心5-10min去上清;沉淀转至耐-192℃螺纹口冻存管,液氮速冻1小时后,-80℃保存或干冰运输;

3. 动物组织/临床组织采集:取绿豆大小(≤0.5cm,≥100mg),去除周围非目标组织,用预冷PBS或生理盐水清洗并吸干,装入耐-192℃螺纹口冻存管,液氮速冻3-4h后-80℃保存,干冰运输;

4. 植物组织组织采集:取≥1g新鲜组织(根、叶、树皮等需PBS清洗去污),剪成小块(长度≤10cm),装入冻存管或锡箔纸包裹,液氮速冻3-4h后-80℃保存,干冰运输。注意:离体后10min内必须速冻,不可直接-80℃保存;叶片建议中午光照好时采集,保持组内一致性;根部组织用离心管保存(勿用锡箔纸);多汁果实建议整果研磨冻干后称重分装;

5. 体液样本:

血清:全血混匀后4℃正立放置,1h内1800g离心10min取上层血清,再13000g离心2min,取上清≥100μL装冻存管,液氮速冻3-4h后-80℃保存,干冰运输;

血浆:用EDTA或肝素抗凝管收集全血,混匀后4℃正立放置,1h内1200g离心10min取上层血浆,再13000g离心2min,取上清≥100μL装冻存管,液氮速冻3-4h后-80℃保存,干冰运输;

细胞上清液/尿液/唾液等:2h内收集至离心管,4℃下1000rpm离心10min去细胞碎片,取上清再2500rpm离心10min,上清装冻存管,可选液氮速冻后-80℃保存,干冰运输;

6. 粪便和肠道内容物样本:分装至耐-192℃螺纹口冻存管(量大时分15-20管),液氮速冻1h后-80℃保存,干冰运输。避免反复冻融。