单细胞测序是在单个细胞水平上对细胞基因组、转录组、表观组进行高通量测序分析的一项新技术，单细胞转录组测序技术于2009年问世至今，也发展出各种不同的方法；随着二代和三代基因测序技术的迅速发展，测序通量逐渐提高，测序成本逐渐降低，这为单细胞测序技术的发展提供了一片沃土，使其成为生命科学里一个非常活跃的研究领域，也更多地被应用到基础医学和临床转化的研究中。10x Genomics单细胞平台，通过微流控系统将单细胞快速分配到油包水的微反应体系中，每个微反应体系中的原始分子会获得唯一的特异性分子标签（Barcode），制备生成的测序文库可以在Illumina平台进行测序，10x Genomics提供数据分析Cell Ranger及可视化软件Loupe Browser，测序实验及分析流程可以和Illumina系统无缝衔接。

图1 10xGenomics单细胞平台捕获工作流程图

应用方向

肿瘤异质性研究
干细胞分化以及组织器官发育研究
神经系统发育研究
免疫方向研究
疾病分型及用药指导

优势

临床样本、哺乳动物、家禽、水生动物、经济作物等众多物种的样本处理经验，累计处理样本数超30000例
支持单细胞领域科学家发表高分文章290+篇，影响因子共4400+
自主开发细胞定义数据库与算法，提供全面的分析模块与多组学联合分析，搭配云平台，全方位满足科研工作者需求

信息分析

单细胞转录组的分析核心是细胞的分群和亚群差异基因的鉴定，单细胞使用10x官方分析软件Cell Ranger和第三方软件Seurat对细胞进行分群和差异分析，对差异基因进行功能富集，从而鉴定亚群的功能特征。

送样建议

1. 可寄送血液、新鲜/冻存组织、细胞系、活体植株等，进行单细胞/核悬液制备，不限物种类型（带polyA尾，参考基因组注释完整），但非常规物种请提前联系销售确认可行性；

2.如样本量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复，以防万一；

3.客户需标明：样本名称，组织类型，离体时间，浸入组织保存液时间；

4.新鲜组织及血液样本寄送：用组织保存液保存新鲜组织进行寄送；客户收到组织保存液后，应在4℃条件下保存（效期3个月，有沉淀/冻融后不可使用），切勿冻存；寄样时，先将样本放入装有组织保存液的储存管中，组织尽量无菌放入液体中，组织保存液应当浸没组织，然后迅速盖紧加封口膜包装好；冰袋寄送（注意不要选择干冰），务必保证在48小时内到达深圳的单细胞样本接收室；

5.血液（全血）/骨髓样本置于EDTA抗凝管中，人4mL，鼠1-2mL；目前除了人和小鼠的血液样本可以制备PBMC/BMMC之外，其余物种均需要联系实验室进行评估；

6.细胞样本寄送：分离的细胞梯度冻存（程序降温仪或者异丙醇-80℃过夜后液氮保存）；建议冻存密度3-6×106cells /mL(管)，每管1mL；将液氮保存的细胞，干冰寄送，干冰量需充足；

7.冻存组织寄送：一般组织建议0.2g-0.5g/管（如需进行流式分选，0.6-1g/管，不同组织有差异），组织直接进行液氮速冻（避免PBS清洗、不可放入保存液后冻存）；干冰寄送，干冰量需充足；10x官网建议：在整个实验过程中RNA酶抑制剂浓度是1U/μL；

8.植物样本寄送：植物类样本支持原生质体制备与植物抽核制备，均需寄送活株；制备的目标组织量建议>2g，幼嫩组织优先，木质含量高的组织类型成功率不稳定，需客户知悉；含淀粉样本（如甘薯、人参、三七、马铃薯等）无法进行原生质体制备，只能抽核处理；

9.动物组织寄送：常规样本送样可参考4.6.7.的建议；

10.样本寄送信息：深圳市宝安区西乡街道共乐社区铁仔路56号金环宇大厦一栋1601。

10x Genomics single-cell RNA-seq (3' expression)